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海洋动物血液基因组DNA提取试剂盒(N1181-N1182)

促销: 631.00~1138.00
运费 ¥0.00
N1181( 50次) N1182( 100次)

海洋动物血液基因组DNA提取试剂盒

产品组分

 

货号

N1181

50次)

N1182

100次)

消化缓冲液DS

15 ml

30 ml

裂解液MS

20 ml

40 ml

蛋白酶K

1 ml

2 ml

去蛋白液PS

30 ml

60 ml

漂洗液PE

15 ml

30 ml

纯化液TE

5 ml

10 ml

DNA纯化柱

 50

 100

说明书

1

1


裂解液MS中含变性剂,请不要直接接触皮肤。

漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

产品说明

本产品可用于海洋动物全血/体液样本的基因组DNA的纯化。纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA,由硅胶膜柱可逆吸附体系内的基因组DNA,经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品适用于鱼类、虾类、贝类动物全血基因组提取,一次可从20 μl全血中提取到3-10 μg高纯度基因组DNAOD260/OD280 =1.7-1.9),此基因组DNA可直接用于PCR酶切等后续实验。

 

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷贝基因的PCR扩增鉴定。

 

保存条件

蛋白酶K室温运输,于-20保存,避免反复冻融。

其余试剂置于室温(15-25)干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液DSMS中有沉淀,可在55加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

 

注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

漂洗液PE第一次使用前请按瓶上标签加入3倍体积的无水乙醇,即15 ml漂洗液PE加入45 ml无水乙醇,30 ml漂洗液PE加入90 ml无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。

消化缓冲液DS和裂解液MS室温保存可能会有沉淀产生,在55℃加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

蛋白酶K请单独保存,不要与裂解液MS混合,如果可能,请在加入蛋白酶K混匀后,稍稍静置再加裂解液MS,可以得到更好的裂解效果。

柠檬酸、EDTA和肝素三种抗凝剂均可使用。但肝素对酶促反应有可能起抑制作用。采血时如没有特殊要求,请使用柠檬酸或EDTA处理血样。

基因组DNA的得率,会因抗凝剂的种类以及血液保存条件的不同而各异。

基因组DNA需长期保存时,建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20℃-80℃

所有离心步骤均为室温进行。

请严格按照操作步骤操作。

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

预备实验:

取血液/体液样本在红细胞计数板进行细胞计数,计算其细胞数量级10x/ml,(7-xml就是提取基因组DNA所需的血液/体液体积。

取血液/体液样本(7-xml加入到一只1.5 ml离心管中,5,000 rpm离心3min,弃上清,收集沉淀。

   如果样本超过1.5ml,可分次加入,离心收集沉淀,务必使离心所得的沉淀中包含105-106的细胞数。

加入200 μl消化缓冲液DS,涡旋振荡直至完全分散。

    如需去除RNA,加入消化缓冲液DS后,再加入4-15 μl RNase A100 mg/mlN9042)溶液,振荡混匀,室温放置5min

加入蛋白酶K 20 μl220 μl裂解液MS,涡旋振荡混匀,65℃温浴10min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠,室温放置5min使溶液冷却。

    加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀,一般65℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 纯度降低。

4  加入220 μl无水乙醇,上下来回颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀,将溶液及絮状沉全部转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

若溶液体积大于DNA纯化柱的容积(700 ?l),可分两次离心

    此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

加入500 μl去蛋白液PS12,000 rpm离心1min,弃滤液。

     此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质洗脱,以获得高质量的基因组DNA

加入500 μl漂洗液PE12,000 rpm离心1min,弃滤液。

     漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

加入500 μl漂洗液PE12,000 rpm离心1min,弃滤液。

8  12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

     此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处,悬空滴加30-100μl纯化液TE。室温放置2min

10  12,000 rpm离心2min,管底即为高纯度基因组DNA-20℃保存。

     纯化液TE可用去离子水代替,但其pH需为8.0-8.5。体积视DNA含量多少、用户对DNA浓度要求而定。

     对纯化液TE进行65℃预热,会提高基因组DNA的产量。


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